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Data are expressed as percentage of BRET induced in the presence of WT Grb14. Acquérir les bases méthodologiques indispensables à toute activité en santé publique et maîtriser les concepts et les méthodes en santé publique afin de pouvoir les appliquer : The blot shown is representative of three independent experiments. Cet enseignement théorique doit être complété par un stage dans un laboratoire de recherche avec soutenance d’un mémoire rapportant le travail réalisé. Sinon, des liens directs vous sont proposés ci-dessous. Interestingly, the former involves residues that are likely to be crucial for the specificity of IR binding with regard to other members of the Grb7 family. — Pour pré-candidater en masters, en formation initiale ou formation continue, veuillez utiliser l’application de candidatures en ligne de l’Université Paris Descartes. Positive and negative regulation of insulin signaling through IRS-1 phosphorylation. D, Effect of Grb14 (WT or S370 mutants) on insulin-induced X. laevis oocyte maturation. This result suggests that the impairment in the formation of the Grb14-IR complex due to the R385N mutation prevented Grb14 inhibition of insulin action. Interaction with Grb14 results in site-specific regulation of tyrosine phosphorylation of the insulin receptor. Avec ce PIR vous pouvez poursuivre avec des masters 2 recherche ou professionnel. Le calendrier des pré-candidatures 2020-2021 pour eCandidat. Candidats au M1 Responsable administrative et pédagogiquePr Isabelle Momasisabelle.momas@parisdescartes.frTél : 01 53 73 97 26. Insulin-induced Grb14 recruitment to the IR was also monitored using the BRET technique. Xenopus oocytes are physiologically arrested at the G2 stage of the first meiotic prophase, and their entry into the M phase, leading to maturation [germinal vesicle breakdown (GVBD)], can be induced by insulin (20). ***, P < 0.001. Similar data were obtained using an in vitro BRET assay, in which the interaction between IR and Grb14 was assessed by incubating cell extracts containing Grb14-EYFP with cell extracts containing tyrosine-phosphorylated IR-luc (supplemental Fig. This contrasts with a previous study reporting a constitutive interaction between the two proteins (14). In Grb14-injected oocytes, PDK1 was undetectable in anti-Grb14 immunoprecipitates performed in the absence of insulin, but after only 5 min exposure to insulin, the complex was formed. Objectifs pédagogiques : Ce parcours est une formation transversale centrée sur l’étude des cellules sanguines et endothéliales permettant d’aborder des aspects variés de la physiologie, de la pathologie, de la recherche clinique et fondamentale. Biological activity was further analyzed using the Xenopus oocyte model and a functional complementation assay measuring cellular proliferation rate in Grb14 knockout mouse embryonic fibroblasts. (13). The peT vector (24) was used for IR transfection in COS-7 cells and the pcDNA3-IR-luc (19) for BRET experiments. All mutations were verified by DNA sequencing. This model has previously been used to investigate Grb14 inhibitory action on insulin signaling (16, 22). The beads were washed three times in lysis buffer, and the resulting immunoprecipitates were subjected to SDS-PAGE analysis and immunodetected with the indicated antibodies. C, Cell proliferation of MEF KO for Grb14 cultured in the presence of 10% FBS and transiently transfected with plasmids coding for Grb14-EYFP (WT or mutants) or with empty vector (Ctrl) as indicated. Responsables : Pr Salima Hacein-Bey, Dr S. Bessoles, Pr Marie Agnès Dragon Durey et Pr Franck Pages. Faculté de médecine Paris Descartes ... (DFGSM2 et DFGSM3) ne sont pas autorisés à s’inscrire au PIR MIcrobiologie. Search for other works by this author on: Protein-protein interaction in insulin signaling and the molecular mechanisms of insulin resistance. Autoradiograms were scanned and quantified using an image processor program (ImageJ). Thus, PDK1 recruitment is likely to be an important component of the Grb14 inhibitory mechanism. The inhibitory effect of the Grb14 E193A mutant on IR tyrosine kinase activity was further investigated in COS cells transfected with expression vectors for IR, IRS-1, and WT or mutant Grb14. Lors de la séparation de l'université de Paris après la loi Faure de 1968, elle est attribuée à l'université Paris Descartes puis devient une « unité de formation et de recherche » (UFR) puis la faculté de Pharmacie de Paris. — Les candidatures pour l’année universitaire 2019-2020 sont ouvertes en ligne du 20 avril jusqu’au 31 mai 2020. Modalité d’inscription en M1 pour la rentrée 2020 pour les filières scientifique et santé pour tous les itinéraires La mention de master « Santé publique » du domaine « Sciences, technologies, santé » de l’université de Paris propose une offre de formation qui se décline en 8 parcours portés par Paris Descartes couvrant largement les différents champs disciplinaires de la santé publique. Entre la 2e et la 3e années, un stage de 2 mois à temps plein est réalisé dans l’une des équipes de recherche de l’université Paris Descartes. The tyrosine phosphorylation state of IRS-1 was analyzed by Western blotting after immunoprecipitation of the protein. To further investigate the role of this site in the interaction between Grb14 and the IR, we mutated the IR R1092 residue, which was close to S370 in the crystal structure of the complex (13). This result thus confirms that PDK1 interacts with Grb14 and further demonstrates that this interaction is induced by insulin in the oocytes. Evidence for a direct interaction between insulin receptor substrate-1 and Shc. The autoradiograms were quantified by scanning densitometry, and the means ± sd are represented as histograms. Skip to content; Jump to main navigation and login; Nav view search Navigation Daidzein supplementation enhances embryo survival by improving hormones, antioxidant capacity, and metabolic profiles of amniotic fluid in sows. Variance equality was determined with a Fisher test, and statistical significance was determined using a Student’s t test. Enzymes were from New England Biolabs (Beverly, MA). A, Cell proliferation of WT MEF or MEF KO for Grb14 cultured in the presence of insulin (100 nm). An important aspect for understanding the Grb14 inhibitory effect on insulin signaling is the appraisal of the role of the interaction with the IR. As shown in Fig. 1B, the IR K1168A mutant displayed a reduced ability (−50%, P < 0.05) to bind to Grb14 in the presence of a conserved insulin-induced autophosphorylation, providing evidence for its role in the IR interaction with Grb14. 1A). Pour les étudiants déjà inscrits en pharmacie (du DFGSP au DES), le site d’inscription est la faculté de Pharmacie de Paris. S1, published as supplemental data on The Endocrine Society’s Journals Online web site at http://mend.endojournals.org). Ce parcours permet un accès à la deuxième année du master Sciences du médicament qui offre 7 spécialités : — Pharmacologie intégrée préclinique et clinique PIPC (Catherine Marchand-Leroux et Valérie Besson)   — Chimie médicinale et pharmacologie moléculaire (Michel Vidal)   — Pharmacocinétique et pharmacotechnie (Xavier Declèves)   — Thérapeutique : du concept au bon usage des produits de santé (Olivier Bourdon)   — Qualité des produits de santé (Sylvie Michel)   — Biotechnologies pharmaceutiques et thérapies innovantes (Pascale Gaussem) — Ingénierie des biomolécules (Nicolas Leulliot). En cas de problème, votre contact est : anne-lucile.metaireau@parisdescartes.fr Objectifs pédagogiques :Ce PIR approfondi les notions de pharmacologie, physiologie et toxicologie avec comme fil conducteur le médicament : recherche de cibles, dosages, applications thérapeutiques entre autres. L'école est conçue comme un ensemble de trois éléments : bâtiment principal, aile des travaux pratiques, jardin botanique[4]. Le troisième cycle (6e année) est réservé à l'apprentissage spécifique de la filière choisie par l'étudiant et à la préparation de la thèse d'exercice. La soutenance de la thèse d’exercice à la fin de la 6e année ou en fin d’internat leur permet d’obtenir le diplôme d’État de docteur en pharmacie selon le cursus commun des études de pharmacie. Indeed, L1045 also makes Van der Waals contacts with Y984, a residue very close to the N-terminal end of the crystallized molecule. The Grb14 isoform seems to be more specifically involved in the regulation of insulin action. — à la vigilance et la sécurité sanitaire. In addition, mutation of the Grb14-S370 residue suggested that its phosphorylation status controlled the biological activity of the protein. Il permet d’acquérir de solides connaissances sur la chimie des principes actifs (analyse structurale, conception et méthodes de synthèse). The increase in the formation of the IR-Grb14 L1045A complex could also be detected in the basal state (P < 0.05). D.G. It was thus interesting to investigate in our models the consequences of the E193A mutation on Grb14 activity. The mutated codons are underlined. In addition, we have provided evidence that although IR binding represents a major mechanism implicated in the Grb14 inhibitory effect, interference with downstream effectors, including PDK1, is also an important aspect of the Grb14 molecular mechanism of action. — Pré-candidature en ligne (du 6 avril au 12 juin 2020) — La commission pédagogique étudiera les candidatures en juin 2020 (en attente). The increased complex formation observed with the L1045 mutant, which occurred both in the basal state and after insulin stimulation, suggests that this substitution enhanced Grb14 affinity for the IR. Ni abordés dans la suite des études pharmaceutiques, ni proposés en parcours d'initiation à la recherche (enseignements issus du parcours Master 1 Santé), deux modules d’une quarantaine d’heures ont été sélectionnés. Les parcours d’initiation à la recherche permettent aux étudiants et aux professionnels des cursus santé (médecine, pharmacie, odontologie, maïeutique, vétérinaire) d’acquérir les prérequis nécessaires pour intégrer un Master 2 dès la fin de la 4e année des études de santé. Grb14 belongs to the Grb7 family of molecular adapters and was identified as an inhibitor of insulin signaling. Inhibition of insulin receptor catalytic activity by the molecular adapter Grb14. Dual effect of the adapter Grb14 on insulin action in primary hepatocytes. Among the Grb7 family of adapters, Grb14 is likely to be particularly involved in the regulation of insulin signaling, as assessed by its tissue expression (8, 11), by its inhibitory effect on IR catalytic activity (12), by its co-internalization with the IR in insulin-stimulated rat liver (10), and by the phenotype of mice deficient for the Grb14 gene (9). The autoradiograms were quantified by scanning densitometry, and the means ± sd are represented as histograms. La faculté de pharmacie de Paris, ancienne Unité de formation et de recherche (UFR) des sciences pharmaceutiques et biologiques, est une composante de l'université de Paris, ancienne université Paris-Descartes, située au 4, avenue de l'Observatoire, dans le 6e arrondissement. Elisa ROSSI – elisa.rossi@u-paris.fr Dr. Lucile COURONNÉ – lucile.couronne@parisdescartes.fr. To establish that the increase in cell proliferation rate of KO MEF was due to the absence of Grb14, KO cells were transfected with a plasmid allowing the expression of a Grb14-EYFP fusion or of EYFP as a negative control. En partenariat avec la faculté de Pharmacie de l’Université Paris Sud et l’École des hautes études en santé publique de Rennes. The IR I1042 mutant was not altered in its ability to recruit Grb14 under insulin stimulation. Les étudiants en pharmacie sont sélectionnés sur dossier et entretien dès le début de la 2e année. Immunoreactive bands were revealed using the ECL detection kit (Pierce, Rockford, IL). Results are means ± sd of four independent experiments. The blots shown are representative of three independent experiments. In living cells, the recruitment of Grb14 at the plasma membrane immediately after insulin stimulation is likely to mobilize a multiprotein complex containing Grb14 and also other proteins including cytoskeleton proteins, allowing us to target Grb14 in close proximity to the IR. For full access to this pdf, sign in to an existing account, or purchase an annual subscription. bioluminescence resonance energy transfer; phosphorylated insulin receptor interacting region; Asante-Appiah E, Kennedy BP2003 Protein tyrosine phosphatases: the quest for negative regulators of insulin action. Nonsevere Diabetic Ketoacidosis and Adrenal Insufficiency: Exploring the Impact of Glucocorticoid Replacement on Metabolic Outcomes and ICU Length of Stay. Organisation de l’enseignement The blot presented is representative of three independent experiments. La première année (PACES) est commune à d'autres formations de santé, et elle est sanctionnée par un concours. The mutated codons are underlined. We confirmed that the mutation of this residue suppressed PDK1 interaction and also provided new evidence that the formation of the Grb14-PDK1 complex is induced by insulin stimulation. Cette mention de master bénéficie de bourses pour la mobilité entrante (MIEM). MEF were obtained from Grb14 WT and KO mice, and the proliferation rate of these cells was measured in the presence of 100 nm insulin or 10% fetal bovine serum (FBS). Le stage donne lieu à la rédaction d’un mémoire écrit avec soutenance orale, 2. The R385N mutation induced a 40% decrease in the insulin-induced BRET signal (Fig. Former des spécialistes de haut niveau pour les organismes français et européens de recherche, les agences sanitaires/environnementales françaises et internationales, les établissements de santé, les entreprises industrielles à dimension internationale, ou encore les bureaux d’études. Le concours de l'internat en pharmacie se déroule au début de cette 5e année (mois de décembre), et permet d'accéder aux fonctions hospitalières (publiques ou privées) en tant que pharmacien hospitalier ou bien biologiste médical. B, Dynamics of insulin-induced interaction between Grb14-EYFP (WT or R385N mutant) and IR-Rluc in HEK293T cells measured by BRET. Ce parcours est une formation par et à la recherche dans un domaine en pleine expansion et très innovant que constitue l’immunologie (réponse immunitaire innée, adaptative, immunologie anti-cancéreuse, immunologie mucosale, maladies auto-immunes, allergies, déficits immunitaires, immunothérapies, vaccination…). 2C. Entre la 3e et la 4e année, un nouveau stage de 3 mois à temps plein doit être effectué dans les mêmes conditions que le premier. S2). Dans le 1er cas, ils effectuent un Master 2 durant leur 6e année, afin de poursuivre par une thèse d’exercice. The substitution of the R385 residue, by reducing the affinity of Grb14 for the IR, could destabilize the IR-Grb14 complex without completely disrupting it.

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